地表水中快速檢測糞大腸菌群的方法

  想要知道地表水是否受到了糞水污染以及污染的程度如何，糞大腸菌群是一項非常重要的參數(shù)。因此如何能夠快速、可靠、準(zhǔn)確的檢測出糞大腸菌群含量對水質(zhì)健康具有重要意義。

  今天我們要講的是通過光度法快速檢測地表水中糞大腸菌群的操作方法，此方法原理是通過一定量的水樣與選擇性培養(yǎng)基混合均勻放置于44.5℃環(huán)境下，糞大腸菌群產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，并分解色原底物釋放出色原體使培養(yǎng)基呈現(xiàn)顏色變化，通過連續(xù)分光光度（波長：300nm～600nm）測定，依據(jù)待測水樣色度變化與水中糞大腸菌群數(shù)成一定關(guān)系的原理，得出糞大腸菌群濃度。

檢測時的干擾及消除

1.活性氯具有氧化性，能破壞微生物細(xì)胞內(nèi)的酶活性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，可在水樣采集時加入硫代硫酸鈉溶液消除干擾。

2.重金屬離子具有細(xì)胞毒性，能破壞微生物細(xì)胞內(nèi)的酶活性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，可在水樣采集時加入乙二胺四乙酸二鈉溶液消除干擾。

檢測所需試劑

1.糞大腸菌群檢測試劑主要成分：

——蛋白胨：5g；

——硫酸錳：0.005g；

——硫酸鎂：0.001g；

——硫酸鋅：0.001g；

——磷酸鹽：1.78g；

——兩性霉素B：0.60g；

——蒸餾水1000mL。

制法：上述試劑溶于蒸餾水中，充分混勻，調(diào)整pH值為7.2～7.4，68.95kPa(115℃)，高壓滅菌20min，分裝貯存于4℃避光備用。也可采用市售商品化培養(yǎng)基制品。

2.硫代硫酸鈉。

3.乙二胺四乙酸二鈉。

4.硫代硫酸鈉溶液：0.10g/mL，

  稱取15.7g硫代硫酸鈉，溶于適量水中，定容至100mL，臨用現(xiàn)配。

5.乙二胺四乙酸二鈉溶液：0.15g/mL，稱取15g乙二胺四乙酸二鈉，溶于適量水中，定容至100mL，此溶液保質(zhì)期為30d。

6.無菌水：取適量純水，經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。

檢測所需儀器

1.采樣瓶：具螺旋帽或磨口塞的100mL、250mL、500mL廣口玻璃瓶。

2.微生物快速檢測儀：

——恒溫培養(yǎng)單元：不少于2個溫控系統(tǒng)，溫度控制精度1℃，可自動調(diào)節(jié)待檢測樣本培養(yǎng)溫度（44.5℃±1℃）；

——檢測單元：不少于4個獨立的檢測系統(tǒng)，可實現(xiàn)多個樣本的同時監(jiān)測；

——數(shù)據(jù)顯示、處理單元：自動輸出檢測結(jié)果，可查詢和顯示歷史數(shù)據(jù)。

3.高壓蒸汽滅菌器：121℃可調(diào)、101.3kpa。

4.量筒：50mL、100mL。

5.移液管：1mL、10mL。

6.天平：感量0.01g。

水樣采集與保存

采集方法

  點位布設(shè)及采樣頻次按照相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。與其它項目一同采樣時，先單獨采集微生物樣品，采樣瓶不得用水樣洗滌，采集水樣于滅菌的采樣瓶中。

  采集河流、湖庫等地表水樣時，可握住瓶子下部直接將帶塞采樣瓶插入水中，約距水面10cm-15cm處，瓶口朝水流方向，拔玻璃塞，使水樣灌入瓶內(nèi)然后蓋上瓶塞，將 采樣瓶從水中取出。如果沒有水流，可握住瓶子水平往前推。采樣量一般為采樣瓶容量的80%左右。采好水樣后，迅速扎上無菌包裝紙。

  采集地表水、廢水樣品及一定深度的水樣時，可使用滅菌過后專用采樣裝置采樣。在同一采樣點進(jìn)行分層采樣時，應(yīng)自上而下進(jìn)行，避免不同層次的攪擾。

  如果采集的是含有活性氯的樣品時，需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液，以除去活性氯對細(xì)菌的抑制作用(每125mL容積加入0.1mL的硫代硫酸鈉溶液)；如果采集的是重金屬離子含量較高的樣品，則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液，以消除干擾（每125mL容積加入0.3mL的乙二胺四乙酸二鈉溶液）。

保存方法

  采樣后應(yīng)在2h內(nèi)檢測，否則，應(yīng)10℃以下冷藏但不得超過6h。實驗室接樣后，不能立即開展檢測的，將水樣于4℃以下冷藏并在2h內(nèi)檢測。

檢測步驟

接種

  接種待測水樣于裝有5mL培養(yǎng)基的檢測瓶中，定容至20mL，水樣與培養(yǎng)基應(yīng)充分混勻。

培養(yǎng)

  打開儀器電源開關(guān)，待儀器穩(wěn)定30 min后，將接種后的檢測瓶放置于微生物快速檢測儀中，按照儀器說明書進(jìn)行操作，設(shè)置檢測溫度為44.5 ℃，點擊“檢測”按鈕，2-18小時，儀器自動培養(yǎng)得出結(jié)果。

空白對照實驗

  采用無菌水作為待測水樣按照接種和培養(yǎng)的操作步驟進(jìn)行空白測定，測試結(jié)果不得檢出，否則該次樣品測定結(jié)果無效，應(yīng)重新測定空白以及待測樣品。

陰性及陽性對照

  將標(biāo)準(zhǔn)菌株制成300-3000個/mL的菌懸液，將菌懸液按接種和培養(yǎng)要求操作，陽性菌株應(yīng)呈現(xiàn)陽性反應(yīng)；陰性菌株呈現(xiàn)陰性反應(yīng)，否則，該次樣品測定結(jié)果無效，應(yīng)重新測定。

  糞大腸菌群的陰性、陽性菌株可以參考相關(guān)的參照表

 

以上內(nèi)容來源于《DB37/T 3787—2019 水質(zhì) 糞大腸菌群測定 光度法》

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